摘要：目的建立配對(duì)盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干細(xì)胞(m ESCs)細(xì)胞系并鑒定其干細(xì)胞生物學(xué)特性。方法體外培養(yǎng)m ESCs,將重組載體p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空載體p EF1α-IRES-AcGFP分別用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染m ESCs,經(jīng)G418梯度及熒光蛋白雙篩選后,使用細(xì)胞免疫熒光染色、免疫印跡法及RT-PCR技術(shù)檢測(cè)Pax6的表達(dá)情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Pax6/m ESCs陽性細(xì)胞的比例。將獲得正確的細(xì)胞系分別采用細(xì)胞免疫熒光染色對(duì)其干細(xì)胞標(biāo)志物階段特異性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶(AP)染色法對(duì)其多能性進(jìn)行檢測(cè),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)增殖指數(shù)Ki67。將Pax6/m ESCs進(jìn)行腎背囊下移植,移植物行HE染色觀察其分化能力。結(jié)果 Pax6成功在m ESCs內(nèi)表達(dá),經(jīng)G418篩選后,獲得Pax6/m ESCs細(xì)胞系,流式結(jié)果顯示,Pax6陽性率為90%,免疫熒光顯示,干細(xì)胞標(biāo)志物SSEA1、OCT4表達(dá)陽性且AP染色陽性,并且在體內(nèi)移植后能向3個(gè)胚層分化。結(jié)論 Pax6成功在m ESCs內(nèi)表達(dá),經(jīng)G418篩選后,獲得細(xì)胞系Pax6/m ESCs并維持良好的干細(xì)胞特性。