摘要：目的探討分離耐鈣犬左室三層細胞的方法,并利用全細胞膜片鉗技術進行電生理記錄。方法采用改良的Langendorff灌流裝置,經主動脈左冠竇插管灌流帶有左室前降支的犬心肌組織塊,分離出單個耐鈣心室肌細胞。先根據解剖部位將心室肌細胞分為內、中、外三層;再采用全細胞膜片鉗技術,在電流鉗模式下,各層隨機選取8個細胞記錄動作電位(AP)、快激活延遲整流鉀電流(IKr)、慢激活延遲整流鉀電流(IKs)、晚鈉電流(INa-L),分析三層的心室肌細胞的電生理特性。結果分離狀態良好的單個心室肌細胞率為90%以上,呈桿狀,表面光滑,橫紋清晰,邊緣銳利,靜止不動;內層(Endo)心室肌細胞沒有尖峰-圓頂樣形態,動作電位復極90%的時程(APD90)最短;中層(Mid)心室肌細胞也有尖峰-圓頂樣形態,但不如外層(Epi)細胞明顯,APD90最長;Epi心室肌細胞有明顯的尖峰-圓頂樣形態,APD90介于Mid與Endo之間。在-30 mV電壓下,Mid細胞INa-L電流密度較Endo、Epi的電流密度稍大,但無統計學差異;三層細胞IKr的電流密度無明顯差異;Mid細胞的IKs的電流密度在三層心肌細胞中最小,Endo、Epi中無明顯差異。結論該方法更加易于操作,節約實驗成本和時間,分離的細胞數量多、活性高;結合解剖部位和電生理特點,能有效鑒別各層心室肌細胞;成功分離出細胞,可用于離子通道特性的研究。